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HE染色操作步驟

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術裏常用的染色法之一 。蘇木精染液為鹼性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸着紫藍色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分着紅色 。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。下面介紹。

材料/工具

甲醛二甲苯酒精蘇木精水溶液,酒精伊紅染

方法

取材,固定:固定液——甲醛()
從人或動物新鮮屍體上取下組織塊(一般厚度不超過0.5釐米)投入預先配好的固定液中(10%,Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質變性凝固,以防止細胞死後的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態結構。

HE染色操作步驟

修剪,脱水,透明:脱水劑——酒精透明劑——二甲苯
不同組織固定時間不同,固定成功後需要修剪25px*25px*5px,放入包埋盒中,流水沖洗(去除組織中的固定液)30分鐘。至於不同濃度的酒精脱水,一般用由低濃度到高濃度酒精作脱水劑,逐漸脱去組織塊中的水份。再將組織塊置於既溶於酒精,又溶於石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精,才能浸蠟包埋。

HE染色操作步驟 第2張

浸蠟,包埋:石蠟
將已透明的組織塊置於已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保温。待石蠟完全浸入組織塊後進行包埋,冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機上切成很薄的切片。

HE染色操作步驟 第3張

切片、展片、烤片:
將包埋好的蠟塊固定於切片機上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺摺,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恆温箱中烘乾。

HE染色操作步驟 第4張

脱蠟、至水、染色:脱蠟劑:二甲苯至水劑:酒精 染色劑:蘇木精水溶液,酒精伊紅染

HE染色操作步驟 第5張
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